喉癌是头颈部肿瘤中最常见的类型[1]。喉癌中最常见的病理类型是喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma上门服务，LSCC)，约占96%[2]。喉癌的主要病因是抽烟、饮酒、老年和男性[3-4]。现在LSCC的休养法子主要有手术、放疗和化疗等，尽管诊疗技艺束缚提升，但在夙昔40年LSCC术后5年的生涯率并无赫然改善[5]。因此伏击需要探索新的休养法子或揣度LSCC术后与预后关联的生物学目的，为颐养或减慢进展提供新的计谋。
MHC-Ⅱ类反式激活卵白（class Ⅱ trans-activator，CⅡTA）属于NOD样受体家眷成员，是参与机体炎症响应的主要因素[6]。炎症是参与肿瘤变成的紧要因素之一[7]。CⅡTA是调整MHC-Ⅱ分子调控的主控开关，亦然IFN-γ激活MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ分子转录的关键基因[8]。CⅡTA所调控的MHC-Ⅰ/Ⅱ分子的抒发水平与头颈部肿瘤免疫逃遁机制有密切的关系，标明CⅡTA在肿瘤免疫调整中的紧要性[9]。MHC-Ⅱ分子高抒发的肿瘤庸俗预后较好, 如非小细胞性肺癌[10]、肝鳞状细胞癌[11]等，而CⅡTA抒发与肿瘤预后关系的研究较少，然而最近研究发现CⅡTA高抒发的肿瘤与较好的预后关联[11-12]，这引起了咱们对CⅡTA抒发水平与LCCC预后关系进行探索性研究。
对于CⅡTA抒发与LSCC患者预后关系的研究国表里尚未见报说念。本研究长入CⅡTA在LSCC组织的抒发水平与LSCC患者临床特征进行关联性分析，并对CⅡTA抒发水平与LSCC患者的预后进行初步研究，以期对LSCC的诊疗或预后评估提供新的念念路。
尊府和法子临床尊府 本研究经复旦大学附庸眼耳鼻喉科病院医学伦理委员会审核批准(编号KJ200801)，统共患者均签署知情欢喜书。采集我院2013年9月至2015年6月收治的80例喉癌患者术后的肿瘤组织样本并制作成组织芯片。入组表率：（1）初度行肿瘤根治性手术，且术前未接管过放疗、化疗；（2）确诊为喉鳞状细胞癌（术后病理）；（3）随访和临床病例尊府无缺。摒除表率：（1）喉非鳞状细胞癌（神经内分泌癌，腺癌，梭形细胞癌等）；（2）伴有其他肿瘤病史；（3）伴有全身系统性疾病病史（系统性红斑狼疮，类风湿关键炎等）。凭证上述表率，摒除非鳞状细胞癌4例，伴有其他肿瘤1例，失访5例，术前放疗患者3例，最终纳入67例。喉癌的TNM临床分期参考第8版好意思国癌症协会(American Joint Committee on Cancer，AJCC)制定的表率。抽烟和饮酒东说念主群的界定为：抽烟≥20支/天（握续时间≥1年）；饮酒≥200 mL/d（握续时间≥1年）。现在也曾戒烟/戒酒的东说念主群（也曾抽烟/饮酒），统计为有抽烟史/饮酒史。随访阻隔时间为2018年10月16日，随访阻隔或患者物化为不雅察阻隔时间，总生涯期(overall survival, OS)为LSCC术后到不雅察阻隔时间。
免疫组化 免疫组化主要试剂：一抗，兔抗东说念主多克隆CⅡTA抗体（好意思国Novus公司, NBP2-59072）；二抗，HRP山羊抗兔(中国Beyotime公司, A0208)；山羊血清（英国Abcam公司，ab7481）。参考CⅡTA免疫组织化法子，完成试验。领先，二甲苯浸泡脱蜡，梯度乙醇（100%、95%、70%、50%）脱水各5 min；紧闭内源性过氧化物酶（3% H2O2，15 min），PBS漂洗3遍（5 min/遍）；抗原建树，抗原建树液（ddH2O：柠檬酸钠缓冲液=100:1），微波炉（高火10 min, 解冻2 min, 中火7 min），待规复至室温取出；加入一抗（1:300山羊血清稀释；对照组加入PBS）；4 ℃过夜；16 h后取出：纪律用PBST、PBS漂洗（均为3遍，5 min/遍）；加入二抗(1:50山羊血清稀释)；PBS漂洗3次（每次5 min），DAB显色5 min傍边，显微镜检查染色情况，苏木素复染，进行后续处分，封片。
免疫组化遵循分析 光学显微镜下不雅察位点染色情况，录取3个不同的视线，按照染色进度与面积揣度染色的强弱，每次评分均由2位病理科医生双盲独处完成，且由第3位病理科医生复评以确保遵循的准确性。染色强度评分:0(－), 1(+), 2(++)，3(+++)。染色面积评分：0(0), 1(1%~25%), 2(26%~50%), 3(51%~75%), 4(76%~100%)。凭证染色面积乘以染色强度的遵循分为：CⅡTA低抒发组(0~6分）；CⅡTA高抒发组(7~12分）。LSCC的肿瘤/间质细胞抒发，均可觉得CⅡTA抒发阳性。
GEPIA GEPIA是一种新开导的积存办事器，基于癌症基因数据库（TCGA）和基因组织抒发数据库（GTEx），且有肿瘤（9 736个）和闲居样本（8 587个）的RNA测序抒发数据。GEPIA（-pku.cn/）可提供多种功能[13]，如肿瘤患者生涯分析、相通基因的检测以及某种基因在肿瘤或闲居组织抒发的各异性分析等。利用GEPIA分析CⅡTA的抒发与头颈部鳞状细胞癌(head and neck squanmous cell carcinoma, HNSCC)患者预后的关系。
统计学分析 领受SPSS 23.0软件对数据进行统计学分析。用χ2考试分析CⅡTA的抒发水平与LSCC患者临床特征的关系。用Kaplan-Meier法分析LSCC患者术后5年的OS，Log-rank考试揣度P值。对CⅡTA抒发情况、淋讨好升沉等因素进行Cox比例风险模子多因素总结分析。P < 0.05为各异有统计学酷好。
遵循LSCC癌组织中CⅡTA抒发水平与患者临床特征的关系 本次研究共纳入67例患者（男性66例，女性1例）, 年纪38~84岁，平均61岁。凭证免疫组化遵循，分为CⅡTA高抒发组（图 1A）和低抒发组（图 1B）。对CⅡTA的抒发与患者年纪、性别、抽烟、饮酒、临床分期、喉癌分型、肿瘤大小等临床特征的关系进行统计分析，遵循败露CⅡTA的抒发水平与LSCC患者临床特征的各异均无统计学酷好（P > 0.05，表 1）。
COX总结多因素分析遵循 本研究将CⅡTA的抒发、淋讨好升沉、饮酒等临床目的纳入COX多因素总结模子，遵循败露饮酒、CⅡTA的抒发水平、肿瘤的淋讨好升沉与LSCC患者术青年涯时间密切关联(表 2)。饮酒、CⅡTA的抒发及淋讨好升沉均为LSCC术后OS的独处影响因素。
LSCC癌组织中CⅡTA抒发水平与预后的关系 67例LSCC患者，物化33例，生涯34例。CⅡTA高抒发组41例，平均生涯时间（49.3±2.6)个月，5年生涯率为41.5%（24/41）；CⅡTA低抒发组26例，平均生涯时间（35.3±3.9）个月，5年生涯率为38.5%（10/26）。Kaplan-Meier法分析LSCC患者术后5年的OS遵循败露，CⅡTA高抒发比CⅡTA低抒发的患者预后好（图 2A, P < 0.05）。
TCGA数据库CⅡTA抒发与HNSCC预后的关系 愚弄TCGA数据库对CⅡTA的抒发与HNSCC的预后进行分析，可长入CⅡTA抒发与LSCC预后的关系进行与之对比分析。遵循败露，HNSCC患者中CⅡTA高抒发组比低抒发组预后好（图 2B, P < 0.05）。
联想跟着MHC-Ⅰ/Ⅱ分子在肿瘤免疫逃遁的作用及机制的研究束缚明确，东说念主们冉冉意志到CⅡTA在肿瘤免疫的紧要性。CⅡTA基因的颓势会导致裸淋巴细胞概述征[14]，而CⅡTA分子的抒发止境与头颈部鳞状细胞癌[15]、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤[16]等疾病发生关联。Yazawa等[17]觉得肿瘤细胞抒发的MHC-Ⅱ分子不错将抗原肽呈递给扶植性T淋巴细胞，有助于抗肿瘤免疫响应。最近有研究觉得CⅡTA在不同肿瘤组织中的抒发，其预后也不尽交流[12, 18]，这为探索CⅡTA抒发与肿瘤的关系提供了一定的研究基础。咱们对CⅡTA分子抒发水平与LSCC患者术后预后的关系进行了初步的研究。
CⅡTA可在多种肿瘤组织中抒发，如三阴性乳腺癌[12]、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤[16]、脂肪赘瘤[19]等。凭证IHC遵循, 咱们分析觉得CⅡTA在LSCC的肿瘤细胞以及部分肿瘤间质细胞中均有抒发。并将CⅡTA抒发情况分为高抒发组（图 1A）和低抒发组，对CⅡTA的抒发水平与LSCC的临床特征进行统计学分析，遵循败露各异无统计学酷好，遵循可能与研究样本量的些许研究，值得进一步研究。尽管CⅡTA抒发与LSCC临床特征的分析无统计学各异，而Cox比例风险模子多因素总结分析遵循败露饮酒、CⅡTA抒发及淋讨好升沉是LSCC术青年涯时间的独处影响因素（P < 0.05），这标明LSCC的发生可能是一个复杂的多因素遵循。
Kaplan-Meier法对LSCC术后5年的生涯分析败露，CⅡTA高抒发比低抒发的LSCC患者术后预后好，各异有统计学酷好（P < 0.05）。Xie等[11]研究觉得，肝鳞状细胞癌肿瘤组织中CⅡTA高抒发庸俗伴有MHC-Ⅱ分子的抒发，且术后的无进展生涯期更长。Forero等[12]在对三阴性乳腺癌患者术后长达11年的随访后觉得，CⅡTA高抒发的三阴性乳腺癌有较好的预后，CⅡTA抒发是三阴性乳腺癌术后无进展生涯期的独处预后因素。咱们推测CⅡTA高抒发的LSCC患者预后较好可能与MHC-Ⅱ分子的抒发加多关联，其在LSCC肿瘤微环境中增强一系列的免疫应付响应，加强机体对肿瘤细胞的杀伤材干。咱们愚弄GEPIA数据库分析CⅡTA的mRNA水平对HNSCC患者的预后价值，对研究遵循进行扶植性考据，遵循败露CⅡTA高抒发组比低抒发组预后好，各异有统计学酷好（P < 0.05）。
双城之战在线观看然而，有研究觉得CⅡTA的抒发可能是加多肿瘤患者物化风险的紧要因素。Tan等[18]觉得CⅡTA抒发升高大约加多肾透明细胞癌的物化风险，CⅡTA的过抒发带领肿瘤细胞抒发MHC-Ⅱ分子参与免疫响应，加重机体的免疫炎症响应而导致癌症进展加速。CⅡTA抒发水平与肿瘤预后的关系不同，这可能与CⅡTA分子所处的肿瘤微环境不同密切关联，甚而于CⅡTA在不同肿瘤类型发达的作用可能不同，仍待进一步的研究和计划。本研究仍有好多局限性：纳入的临床病例样本量不够大；纳入的女性LSCC病例数相对较少；随访时间不够长。
总之上门服务，CⅡTA行动调控MHC-Ⅱ分子抒发的关键基因，在参与肿瘤免疫调控中发达紧要作用。本研究遵循败露CⅡTA高抒发的LSCC患者比低抒发人预后好（OS)。本研究遵循领导CⅡTA抒发水平可能对LSCC患者术后诊疗及预后的揣度有一定的参考酷好。